对于想要了解如何配制5% BSA封闭液的读者,以下是一些相关知识。
首先,需要取1克BSA,加入蒸馏水,定容到100毫升即可得到5% BSA溶液。
常见的稀释液有5%脱脂奶粉或者5% BSA溶液。在ELISA实验中,最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的BSA,但是否需要封闭取决于实验的具体条件。例如,双抗体夹心法,只要酶标记物是高活性的,操作时洗涤彻底,不经封闭也可得到满意的结果。但是,如果使用单抗腹水直接包被,其中大量非抗体蛋白在包被时同样也吸附在固相表面,已经起到了类似封闭剂的作用。在间接法测定中,封闭一般是不可少的。
牛血清白蛋白(BSA)是常用的封闭剂之一,其相对分子质量为10的4次方级别,不是固定的,是多聚物,有的地方测得的为70000。在PCR实验中,牛血清白蛋白也会被用到。
牛血清白蛋白是血液的主要成分,分子量为68kD,等电点为4.8。其中,含氮量为16%,含糖量为0.08%,仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。
牛血清蛋白溶液可以作为测量蛋白质含量的标准曲线用。